Alonso Cabrera: el veedor Cabrera fue una figura importantísima del período 1538-1545 en el Río de la Plata. Había sido enviado a la región por el rey para reorganizar la conquista tras el abandono de Pedro de Mendoza y su primera obligación era determinar quién había sido designado por el adelantado como sucesor. Después de varias desavenencias con Ruiz Galán, se inclinó por nombrar como teniente de gobernador a Domingo de Irala, esperando que Juan de Ayolas (la persona designada por Pedro de Mendoza) regresase de sus exploraciones para ponerse al mando de la conquista. Esta sociedad con Irala será fundamental para realizar la despoblación de Buenos Aires en 1541 y, luego, enfrentar a Álvar Núñez Cabeza de Vaca. Cabrera fue fundamental en la construcción de los argumentos judiciales que justificarían su derrocamiento y viajó a España junto a él para representar a los primeros conquistadores del Río de la Plata en los tribunales regios. Moriría poco después de haber llegado a España.

Alonso Riquelme: Alonso Riquelme de Guzmán (1519-1573) fue un conquistador oriundo de Jeréz de la Frontera y sobrino del Segundo Adelantado al Río de la Plata, Álvar Núñez Cabeza de Vaca, con quien llegó al Río de la Plata en 1541. Fue uno de sus más acérrimos partidarios durante la gobernación de Cabeza de Vaca y se convirtió en una de las figuras más prominentes de la facción de los "leales" una vez que aquel fuera expulsado de la provincia en 1545.Fue forzado por Domigo de Irala a casarse con una de sus hijas mestizas, unión de la cual nació Ruy Díaz de Guzmán.Bibliografía:Ricardo Lafuente Machaín, Alonso Riquelme de Guzmán, Buenos Aires, Amorrurtu, 1942.Tieffemberg, Silvia, "Estudio Introductorio", en Díaz de Guzmán, Ruy, Argentina. Historia del Descubrimiento y Conquista del Río de la Plata de Ruy Díaz de Guzmán, Buenos Aires, Editorial de la Facultad de Filosofía y Letras-UBA, 2012.Fuentes "Información hecha en Jerez de la Frontera a pedimento de Cabeza de Vaca para verificar ciertas cartas", en Núñez Cabeza de Vaca, Álvar, Relación de los Naufragios y Comentarios de Álvar Núñez Cabeza de Vaca, adelantado y gobernador del Río de la Plata. Ilustrado con varios documentos inéditos. Tomo Segundo, Madrid, Imprenta General de Victoriano Suárez, 1906, p. 289 (GGV 52/975; AGI Justicia 1131), 1545.

Álvar Núñez Cabeza de Vaca: Jerez de la Frontera, 1488/1490 - Sevilla, 27 de mayo de 1559. Descubridor y conquistador español que exploró la costa sur de Norteamérica desde la actual Florida pasando por Alabama, Misisipi y Luisiana y se adentró en Texas, Nuevo México, Arizona​ y en el norte de México hasta llegar al Golfo de California, territorios que pasaron a anexionarse al Imperio Español dentro del Virreinato de Nueva España. El rey Carlos I de España le otorgó el título de Segundo Adelantado y lo nombró capitán general y gobernador del Río de la Plata, Paranáguazu y sus anexos.​ y fue el primer europeo en llegar a las cataratas del Iguazú y que exploró el curso del río Paraguay.

Domingo de Irala: Domingo Martínez de Irala (Vergara de la Hermandad de Guipúzcoa, Corona de Castilla, 1509 - Asunción del Paraguay, Virreinato del Perú, 3 de octubre de 1556) fue un conquistador, explorador y colonizador español que como lugarteniente de Juan de Ayolas quien lo nombrara interinamente hasta que regresara como teniente de gobernador de La Candelaria en 1537, luego lo sería de hecho, y posteriormente elegido por el pueblo según real cédula, como teniente de gobernador general de Asunción.Ocupó tres veces el cargo de gobernador interino del Río de la Plata y del Paraguay, en los períodos de 1539 a 1542, de 1544 hasta 1548 y por último desde 1549. El emperador Carlos V lo nombraría definitivamente como titular en el cargo gubernamental en el año 1555, que lo ostentaría hasta su fallecimiento.En 1543 fundó en el Chaco Boreal el Puerto de los Reyes, a orillas del río Paraguay y del pantano de los Jarayes, sobre las costas de la laguna La Gaiba.Avellaneda, Mercedes; Perusset, Macarena, "Irala, el primer estratega del Plata", en Historia Paraguaya. Anuario de la Academia Paraguaya de la Historia, vol. XLVI, 2006, pp. 319-363.Lafuente Machain, Ricardo, El gobernador Domingo de Irala, Asunción, Academia Paraguaya de la Historia, 2005 [1939].

Esteban de Vergara: sobrino de Domingo Martínez de Irala. En 1554 su tío lo envió a Madrid para que diese cuenta al rey de sus servicios. Regresó a Asunción, llegando por tierra desde Brasil, con el nombramiento del rey para Martínez de Irala como gobernador del Río de la Plata.

Felipe de Cáceres: contador y tesorero en la armada de Pedro de Mendoza y luego en la conquista del Río de la Plata. Uno de los líderes de la facción contraria Cabeza de Vaca, estuvo implicado en todas las maniobras que condujeron a su destitución, prisión y destierro.

Francisco Ortiz de Vergara: conquistador y colonizador español. Sucedió a Gonzalo de Mendoza en el gobierno del Río de la Plata con sede en Asunción. Hijo de Francisco de Vergara y Beatriz de Roelas. Fue nombrado por los conquistadores y confirmado por el obispo Pedro de Latorre en 1558. Fue depuesto por la Real Audiencia de Charcas en 1564 y regresó a España en 1565. Hermano de Ruy Díaz de Melgarejo En 1559 enfrento la rebelión de dos manzebos, Pablo y Don Narazio, hijos de un Principal local llamado a Curupiratí de la tribu xaraje junto a Nufrio de Chaves, el 3 de mayo de 1560 en los campos de Acahai o del Acaraiba Ortiz les vence, el ejército rebelde dividido en cuatro cuerpos o columnas sumaba 16.000 guerreros guaraníes, la victoria se logró gracias a la llegada oportuna de indios amigos, se mataron más de 1.000 rebeldes. Durante su gobierno hubo numerosos intentos fallidos de crear nuevos asentamientos (Sancti Spiritus, San Francisco y Santa Cruz de la Sierra). Este último, en el sur de la Cuenca del Amazonas, fue un éxito, pero sólo después de que la ciudad se había movido más de 200 kilómetros desde el lugar elegido por Ñuflo de Chaves. El contrato de arrendamiento anterior fue cerca de San José de Chiquitos, y es hoy un sitio arqueológico conocido como Santa Cruz la Vieja. Lo sucedió el adelantado Juan Ortiz de Zárate.

Francisco de Aguirre: también conocido como Francisco de Aguirre "el Viejo" (Talavera de la Reina, Corona de Castilla, 1500 - La Serena, Capitanía General de Chile, 1581). Conquistador español que participó en la conquista de Chile y del noroeste de Argentina. En su juventud se incorporó a las tropas imperiales de Carlos I de España. En 1525, Aguirre tuvo una destacada actuación en la memorable batalla de Pavía, en la que los soldados de Carlos I derrotaron a los franceses y aprehendieron al rey Francisco I de Francia y en 1527 participó del "saqueo de Roma". Las cartas y sus documentos revelan que poseía una inteligencia cultivada. De entre los conquistadores, fue uno de los que más legítimos títulos podía blasonar de la nobleza de su cuna. En 1534, se embarcó hacia América. Desde la isla de Cuba viajó al Perú en 1537, junto a 400 soldados castellanos que venían a socorrer a Francisco Pizarro, que luchaba contra los incas. En Panamá se hizo de caballos, armas, un negro y criados españoles. Arribó al Perú al tiempo que Pizarro había capturado al Inca Atahualpa, al que ejecutó. De inmediato, Aguirre se puso a las órdenes del conquistador del Perú y tuvo destacada actuación en todas las campañas y en la dominación de los incas. Más tarde ayudó al capitán Diego de Rojas a dominar y poblar la Provincia de Charcas, donde fue durante dos años teniente.Asignado como gobernador de Chile a la muerte de Pedro de Valdivia, fue también gobernador del Tucumán en tres oportunidades y fundador de las ciudades de La Serena (Chile) y Santiago del Estero (Argentina).

García Rodríguez Vergara: capitán, natural de Castilla la Vieja; viene con Cabeza de Vaca. Se opone al nombramiento de un gobernador propietario, durante la ausencia de Irala. Asiste a la elección de su sucesor.

Gonzalo de Mendoza: destacado capitán de la armada de Pedro de Mendoza y luego de la conqusita del Río de la Plata y Paraguay. Realizó varios viajes desde le puerto de Buenos Aires a la costa de Brasil con la intención de obtener bastimentos y trajo consigo varios náufragos y lenguas instalados en el Brasil. Ya en el Paraguay, fue uno de los primeros capitanes españoles en emparentarse con los caciques carios de las cercanías de Asunción. Ocupó importantes cargos políticos y militares bajo los gobiernos de Domingo de Irala y Álvar Núñez Cabeza de Vaca, actuando como teniente de gobernador y como gobernador interino.

Juan de Salazar de Espinosa: (1508-1560) fue una de las figuras políticas más importantes de la temprana colonización del Río de la Plata. Fue un capitán de Pedro de Mendoza a quien el Adelantado le encargó la importante   misión de seguir la huella de Juan de Ayolas río arriba. En 1537 fundó un fuerte en la confluencia de los ríos Paraguay y Pilcomayo, con el acuerdo de los guaraníes carios de la región. De hecho, Salazar fue uno de los primeros capitanes en emparentase con los caciques carios y se constituyó en uno de los negociadores españoles más eficaces y respectados entre ellos. Juan de Salazar aceptó a Domingo de Irala como teniente de gobernador en 1539, aunque después pareció alinearse más bien con el adelantado Álvar Núñez Cabeza de Vaca. De hecho, fue nombrado por este último como su teniente de gobernador una vez encarcelado por la facción de Domingo de Irala. Esto le valió se expulsado de la provincia con Cabeza de Vaca en 1545. En 1550 volvió a embarcarse hacia el Río de la Plata con el cargo de regidor en la armada de Juan de Sanabria. Recién llegaría a Asunción en 1555, donde fue reconocido como Regidor y Tesorero después de reconocer a Irala como gobernador, de acuerdo al nombramiento regio que había recibido.

Lucía de Miranda: española, esposa de Sebastián Hurtado.

Martín de Orue: conquistador español nacido en Orduña en 1517. Llegó a Rio de la Plata con la expedición de Alonso Cabrera pero regreso muy pronto a España por desaveniencias con el jefe de la expedición. Regresó nuevamente a América en la expedición de Alvar Nuñez hacia el Paraguay y años más tarde se enemistó con él, tomando parte en la revolución que le quitó el mando. Fue hombre de confianza de Irala y más tarde lo fue también de Juan Ortiz de Zárate.

María de Mendoza: como dice el texto de Rui Díaz de Guzmán, María de Mendoza era pariente de Pedro de Mendoza y se había casado en 1522 con Francisco de los Cobos y Molina, un noble súmamente influyente en la corte real.

Nuflo de Chaves: también conocido como Nufrio de Chávez (Cáceres de la Extremadura leonesa, Corona de España, 1518 – aldea Mitimi de la laguna de los Xarayes, gobernación de Santa Cruz de la Sierra del Virreinato del Perú, 3 de octubre de 1568). Explorador y conquistador español, conocido por sus exploraciones del actual territorio del Paraguay y la zona suroriental de la actual Bolivia y por haber fundado la ciudad de Santa Cruz de la Sierra en 1561. Llegó a territorio americano con el segundo adelantado del Río de la Plata, Don Alvar Núñez Cabeza de Vaca y fue el continuador de la política colonizadora de Domingo Martínez de Irala. Su actividad permitió extender la colonización por esas regiones. Fue el primer hombre que atravesó el continente, partiendo del Atlántico al Pacífico, para lograr la conquista del centro de América meridional.

Pedro de Segura: Capitán: de Guipúzcoa; había militado en Itatin, y en las indias pasa del Perú al Paraguay. Casa con una hija de Irala. Reemplaza a Rodríguez de Vergara en el mando de Ontiveros. La guarnición se resiste a reconocerle; y él vuelve a la Asumpción. Lleva a una nao surta en el puerto de San Gabriel los despachos de Irala para España, y vuelve a la Asumpción. Va a atacar a los indios. Sale de la Asumpción con una compañía de soldados. Acompaña al Gobernador Vergara al Perú, llevando su mujer e hijos.

Pedro de Zabala Segura: capitán, hidalgo de Guipuzcoa, había sido soldado imperial en Italia y más tarde viajó al Paraguay con Ñuflo de Chaves en 1549. Tuvo un rol destacado en Asunción y se casó con Ginebra Martínez de Irala, hija mestiza del gobernador Martínez de Irala. Falleció en 1601 en Tomina, alto Perú.

Úrsula de Irala: madre de Ruíz Díaz de Guzmán. Hija de Domingo Martínez de Irala y la guaraní Leonor (Iboty-I Yu) de Irala.